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層析實驗冷柜廠家介紹柱層析實驗

 更新時間:2015-09-28    點擊量:2791

1、裝柱子:

   裝柱子(添硅膠)時,有兩種方法:即濕法裝柱和干法裝柱,二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法,硅膠(固定相)的上表面一定要平整,并且硅膠(固定相)的高度一般為15cm左右,太短了可能分離效果不好,太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?,再填入柱子中,然后再加壓用淋洗?ldquo;走柱子”,本法大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結(jié)實,沒有氣泡。干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠,然后再輕輕敲打柱子兩側(cè),至硅膠界面不再下降為止,然后再填入硅膠至合適高度,后再用油泵直接抽,這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實。

2、上樣:

   上樣也有干法和濕法之分;干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后,再加入少量硅膠,拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩,但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑(好就是展開劑,如果展開劑的溶解度不好,則可以用一極性較大的溶劑,但必須少量)將樣品溶解后,再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液,沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后再加入。濕法較方便,熟手一般采用此法。

3、走柱子:

   接著是用淋洗劑“走柱子”,一般淋洗劑是采用TLC分析(后有詳細介紹)得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓,下面再用油泵抽,這樣可以加快速度。干法裝柱較方便,但大的缺陷在于"走柱子"時,由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱(可以用手摸柱子明顯感覺到),容易產(chǎn)生氣泡,這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚、二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺,但是一旦撤去壓力,如在上樣、加溶劑等操作的時候,氣泡就會釋放出來,嚴重時,整個柱子變花,樣品不可能平整地通過,當然也就談不上分離了。

解決的辦法是:*、硅膠一定要結(jié)實;第二、一定要用較多的溶劑"走柱子",一定要到柱子的下端不再發(fā)燙,恢復到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠的上層填上一小層石英砂,防止添加溶劑的時候,使得樣品層不再整齊。但個人感覺是如果小心上樣,添加溶劑,則沒有這個必要。

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